隨著市場不斷成長，競爭日趨白熱，Peptide 合成服務的收費也愈來愈低廉，對使用者而言是一大福音，有鑑於此， 提供peptide合成服務的廠商或研究機構自行成立的peptide 合成核心實驗室無不絞盡腦汁降低成本以確保競爭力， 然而， Novabiochem 對此趨勢提出一些思考方向，期待能協助使用者在能兼顧高純度peptide 與高產率的前提下，獲得最大利潤與更安心的服務。
本文將針對peptide synthesis 的起始原料 ( 20 種Fmoc amino acid) 探討起，使用者都熟知， 隨著合成步驟的增加， 產率與純度都會下降，因此，如果每一步驟coupling 的效率愈差， 結果將導致最終產物的產率大幅下降與增加HPLC 純化的困難度!
以上種種所代表的意義如下,
1. 反覆的HPLC 純化將降低產率
2. 過低的產率導致重複的合成步驟
3. 無法移除的不純物將降低整體純度
4. 無法移除的不純物也會降低peptide 活性
要避免上述結果發生有賴於每一個合成步驟都是完整的且每一個Amino acid 衍生物都是高純度的 !
要知道，一段20 amino-acid peptide的製程需經過將近40個獨立的化學反應才有辦法得到高品質的產物。
因此，起始原料(Fmoc amino acid)的選擇往往扮演決定性的角色， 不可謂不重要 !
Novabiochem考量20 種standard Fmoc amino acid的產品規格，提出以下論述，希望能提供使用者更安心的工作品質 !
讀者可由下方比較表看出，Novabiochem 針對20 standardFmoc amino acid做了規格上的加強與改善。
1. 鏡像異構物純度鑑定 : 確保D-amino acid content < 0.2 % (Threonine and Isoleucine 例外<0.3%)
- 由於L- , D- form 鏡像異構物於HPLC 純化時retention time 相同，因此， 純化時需用到Chiral column，增加純化的困難度 !
- 鏡像異構不純物一般而言不易偵測到，同時也不易移除， 最終結果會影響到peptide 的生物活性
2. Standard Fmoc aminoacid 純度再提升 : 98% to99%讀者或許有疑問， 剩下的1 % 不純物從何而來?內容物為何? 請見下方舉例說名。
- β-Ala 的生成通常發生於合成Fmoc amino acid的過程中, 其他如Fmoc-β-Ala-Xaa(PG)-OH、Fmoc-Xaa(PG)-Xaa(PG)-OH這類不純物的存在都將導致錯誤的sequence!
- 在合成過程中， coupling 這些impurity 也會造成最終產率的下降，同時也會增加純化的困難度!
- 使用高純度起始原料(Fmoc amino acid)才是高產率與長片段peptide的
3. Ethyl acetate 與 Acetic acid content
- 多數的Fmoc amino acid 於合成過程中會用到 ethyl acetate， 殘存的ethyl acetate會水解成 acetic acid，造成peptide synthesis 中斷，因此，Acetic acid 被稱為“peptide synthesis 的殺手“
- 鑒於Acetic acid於HPLC 分析中難以被偵測到，因此，往往為使用者所忽略，甚至苦惱於如何提升產率，殊不知Acetic acid 可能就是元兇!
- 在一個coupling 的步驟中，0.1% acetic acid 不純物有可能造成5% 的反應被中斷!也就是說一個 20 mers的 peptide 的產率會下降 75% !
Novabiochem規格上的強化讓您在胜肽合成的長路上走得更踏實。
Fmoc-amino acids can contain several impurties
Also small quantities add up to a significant extend within your peptide
These impurities can be very hard to detect and to remove from your peptide
The only way to assure that thiese impurities are not present in your peptide is tp use highly pur Fmocs.......
........from Novabiochem
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